偶看新闻湖北身份证进度查询网:迪马科技【固相萃取讲座】问答节录1
来源：百度文库 编辑：偶看新闻 时间：2024/06/12 20:45:54
迪马科技——固相萃取技术及应用讲座问答摘录：
问题一
问个实际应用中的加液问题，当我们进行活化、净化，洗脱等典型的固相萃取操作时，会使用不同溶剂，这时的操作要求在液面下降到筛板时换加不同溶剂，加得太晚，会使填料中干涸产生气泡，影响结果的稳定性（甚至会因为溶液的张力问题而使液面无法下降）。相反，如果加得太早，会使加入溶液和在筛板上的原有溶液混合，产生一个其实是我们不希望存在的、无法预料极性的新洗脱液，使结果的可靠性大打折扣。特别是进行批量检测时，这个问题更加突出。
回答：使用硅胶键合吸附剂比如C18时，加样太晚导致的“柱床干涸”会进一步导致“样品保留不住”，目前已经有聚合物基质的亲水亲脂平衡小柱推出，比如迪马科技的ProElut PLS，该吸附剂表面有亲水基团，即使柱床被抽干，吸附剂也不干燥，样品的回收率不受影响，更多详情请参考讲座课件。
另外，我想指出“如果加得太早，会使加入溶液和在筛板上的原有溶液混合，产生一个其实是我们不希望存在的、无法预料极性的新洗脱液，使结果的可靠性大打折扣”，这种情况不会出现。因为上样前对小柱的操作不仅仅是“活化”，而是“活化/平衡。对于反相柱和离子交换柱，活化液往往是甲醇，平衡的时候可以用水也可以用样品溶剂，如果您使用了样品溶剂进行平衡，那么样品加早了，柱床中原来存在的也是样品溶剂，溶液体系一点儿也没改变啊。更多详情请参考讲座课件。
问题二
淋洗和洗脱有什么区别?
回答：
1 淋洗——Washing，如果采用的是保留目标物的SPE模式，淋洗是用于去除干扰物的；洗脱(Elution)，将目标化合物从SPE柱上洗下来；
Washing一词，本人更倾向于翻译成“清洗”，不过国内的文献以及标准多使用“淋洗”，所以就按国内通用的说法了。
SPE操作的第一步就是活化小柱。
问题三
常用淋洗溶剂和洗脱溶剂应该有区别，主要是哪些呢？举例说明下，谢谢。
回答：在保留目标化合物模式的SPE操作过程中，上样后，目标化合物和部分干扰物被保留在小柱中，淋洗的目的在于将保留性弱于目标化合物的那部分干扰物洗下来，所以加入淋洗液后，一部分干扰物流出小柱，而目标化合物仍残留在小柱中；接下来加入洗脱液才能将目标化合物洗下来，因而目标化合物的洗脱强度强于淋洗液。在反相柱上，洗脱液的极性弱于淋洗液，在正相柱上，洗脱液的极性强于淋洗液。对于不同的分析项目，所以没有确定的淋洗液和洗脱液。不过，我们针对亲水亲脂平衡柱以及混合型离子交换柱总结出一套通用淋洗液和洗脱液。比如ProElut PLS(亲水亲脂平衡柱，一款反相小柱)，淋洗液为5%甲醇水溶液，洗脱液为纯甲醇。另外几款小柱的通用方法详见附件。
通用方法的优点在于能对大多数适用于该小柱的化合物得到较好的回收率，但若想在保证回收率的情况下得到较好的净化效果，淋洗液和洗脱液有时还需要优化，比如用PLS分析四环素类药物，开发方法前先进行淋洗曲线的操作，可知40%甲醇水溶液淋洗时，目标化合物开始被洗下来，80%甲醇水溶液恰好完全被洗下来，所以选择30%甲醇水进行淋洗，80%甲醇水进行洗脱，能同时满足回收率和净化效果。
我们出版的固相萃取技术及应用第二版详细介绍了固相萃取的建立方法，里面的内容可以指导您正确选择样品溶剂、淋洗液、洗脱液。如果您觉得固相萃取方法建立比较麻烦，也可以参考热点固相萃取小柱的通用操作方法，里面明确指出了样品溶剂、淋洗液、洗脱液。
迪马科技“固相萃取技术及应用第二版”提供印刷品和电子版，您可以联系我们免费索取印刷品。
问题四
请问洗脱速度对回收率有多大的影响。
回答：SPE操作过程中，上样和洗脱过程需要控制液体流速，因为上样时流速过快，会导致化合物保留不足，而洗脱过快会导致洗脱不足。实验证明，当流速不超过5 mL/min时，回收率是不会受到影响的。
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问题十
请问：除了godblesschina介绍的“1、样品溶液含有较多颗粒杂质，堵塞了筛板；2、样品溶液黏度太高；3、SPE 柱柱床太高，对液体的阻力过大”，还存在样品中脂肪含量高，最易堵塞筛板，使得流速很低，如何来解决？还有就是样品溶
液黏度高时，由于方法灵敏度的原因，不能用稀释来解决时，有什么好的办法？
回答：
1 脂肪含量高的样品，可以在上样前用正己烷除脂(当然必须确定目标化合物不被正己烷萃取掉)，这是比较常用的方法。
2 对样品进行稀释后再上样，这是在浓缩前进行的，根本不会改变灵敏度。举例，5 g蜂蜜上样，最后定容到1 mL；5 g蜂蜜+20 mL水上样，最后定容到1 mL。灵敏度和检出限丝毫未改变，但样品被稀释更容易通过小柱。
问题十一
请问：一些SPE柱，打开是包装时，看到筛板与吸附剂不紧密时，可不可继续使用？
回答：一般情况下，筛板和填料间如果有空隙属于质量问题。但某些SPE会认为留下空隙，比如石墨化炭黑的小柱，由于填料太细，生产者留下少许空隙，使填料不至于太紧，让液体能够顺利通过。
问题十二
现在有一个供应商向我们推销固相微萃取器材，这个能不能讲讲这种技术的优缺点。
回答：简单说一下差别：SPME目前仅限于挥发性样品(比如植物挥发性成分分析)和液体样品分析，范围比SPE窄很多。不过在挥发性样品和液体样品分析时，SPME的操作要比SPE稍微简单些；SPME的净化效果不如SPE。
问题十三
请问：SPE有没有有效期，放置时间过长，会造成什么影响？
回答：任何产品都是有有效期的。放置时间过长，吸附剂基团可能会发生氧化、自然分解、和光解等问题。ProElut 产品采用了真空包装，保证产品在两年内使用不会有问题。
问题十四
请问：固相萃取柱的局限是什么？
回答：固相萃取的方法依赖性较大。比如您进行A项目时的方法不能用于B项目。每一个具体的项目都需要重新建立方法。另外固相萃取方法的建立涉及到目标化合物性质、基质性质、提取溶液、样品溶剂、淋洗液、洗脱液等均需要考虑，涉及的知识面比较广，很多分析工作者限于知识面，在开发方法时困难重重。不过，有实力的SPE厂家会开发热点方法，并编撰技术手册，为用户提供了很大的方便。
问题一
问个实际应用中的加液问题，当我们进行活化、净化，洗脱等典型的固相萃取操作时，会使用不同溶剂，这时的操作要求在液面下降到筛板时换加不同溶剂，加得太晚，会使填料中干涸产生气泡，影响结果的稳定性（甚至会因为溶液的张力问题而使液面无法下降）。相反，如果加得太早，会使加入溶液和在筛板上的原有溶液混合，产生一个其实是我们不希望存在的、无法预料极性的新洗脱液，使结果的可靠性大打折扣。特别是进行批量检测时，这个问题更加突出。
回答：使用硅胶键合吸附剂比如C18时，加样太晚导致的“柱床干涸”会进一步导致“样品保留不住”，目前已经有聚合物基质的亲水亲脂平衡小柱推出，比如迪马科技的ProElut PLS，该吸附剂表面有亲水基团，即使柱床被抽干，吸附剂也不干燥，样品的回收率不受影响，更多详情请参考讲座课件。
另外，我想指出“如果加得太早，会使加入溶液和在筛板上的原有溶液混合，产生一个其实是我们不希望存在的、无法预料极性的新洗脱液，使结果的可靠性大打折扣”，这种情况不会出现。因为上样前对小柱的操作不仅仅是“活化”，而是“活化/平衡。对于反相柱和离子交换柱，活化液往往是甲醇，平衡的时候可以用水也可以用样品溶剂，如果您使用了样品溶剂进行平衡，那么样品加早了，柱床中原来存在的也是样品溶剂，溶液体系一点儿也没改变啊。更多详情请参考讲座课件。
问题二
淋洗和洗脱有什么区别?
回答：
1 淋洗——Washing，如果采用的是保留目标物的SPE模式，淋洗是用于去除干扰物的；洗脱(Elution)，将目标化合物从SPE柱上洗下来；
Washing一词，本人更倾向于翻译成“清洗”，不过国内的文献以及标准多使用“淋洗”，所以就按国内通用的说法了。
SPE操作的第一步就是活化小柱。
问题三
常用淋洗溶剂和洗脱溶剂应该有区别，主要是哪些呢？举例说明下，谢谢。
回答：在保留目标化合物模式的SPE操作过程中，上样后，目标化合物和部分干扰物被保留在小柱中，淋洗的目的在于将保留性弱于目标化合物的那部分干扰物洗下来，所以加入淋洗液后，一部分干扰物流出小柱，而目标化合物仍残留在小柱中；接下来加入洗脱液才能将目标化合物洗下来，因而目标化合物的洗脱强度强于淋洗液。在反相柱上，洗脱液的极性弱于淋洗液，在正相柱上，洗脱液的极性强于淋洗液。对于不同的分析项目，所以没有确定的淋洗液和洗脱液。不过，我们针对亲水亲脂平衡柱以及混合型离子交换柱总结出一套通用淋洗液和洗脱液。比如ProElut PLS(亲水亲脂平衡柱，一款反相小柱)，淋洗液为5%甲醇水溶液，洗脱液为纯甲醇。另外几款小柱的通用方法详见附件。
通用方法的优点在于能对大多数适用于该小柱的化合物得到较好的回收率，但若想在保证回收率的情况下得到较好的净化效果，淋洗液和洗脱液有时还需要优化，比如用PLS分析四环素类药物，开发方法前先进行淋洗曲线的操作，可知40%甲醇水溶液淋洗时，目标化合物开始被洗下来，80%甲醇水溶液恰好完全被洗下来，所以选择30%甲醇水进行淋洗，80%甲醇水进行洗脱，能同时满足回收率和净化效果。
我们出版的固相萃取技术及应用第二版详细介绍了固相萃取的建立方法，里面的内容可以指导您正确选择样品溶剂、淋洗液、洗脱液。如果您觉得固相萃取方法建立比较麻烦，也可以参考热点固相萃取小柱的通用操作方法，里面明确指出了样品溶剂、淋洗液、洗脱液。
迪马科技“固相萃取技术及应用第二版”提供印刷品和电子版，您可以联系我们免费索取印刷品。
问题四
请问洗脱速度对回收率有多大的影响。
回答：SPE操作过程中，上样和洗脱过程需要控制液体流速，因为上样时流速过快，会导致化合物保留不足，而洗脱过快会导致洗脱不足。实验证明，当流速不超过5 mL/min时，回收率是不会受到影响的。
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液黏度高时，由于方法灵敏度的原因，不能用稀释来解决时，有什么好的办法？
回答：
1 脂肪含量高的样品，可以在上样前用正己烷除脂(当然必须确定目标化合物不被正己烷萃取掉)，这是比较常用的方法。
2 对样品进行稀释后再上样，这是在浓缩前进行的，根本不会改变灵敏度。举例，5 g蜂蜜上样，最后定容到1 mL；5 g蜂蜜+20 mL水上样，最后定容到1 mL。灵敏度和检出限丝毫未改变，但样品被稀释更容易通过小柱。
问题十一
请问：一些SPE柱，打开是包装时，看到筛板与吸附剂不紧密时，可不可继续使用？
回答：一般情况下，筛板和填料间如果有空隙属于质量问题。但某些SPE会认为留下空隙，比如石墨化炭黑的小柱，由于填料太细，生产者留下少许空隙，使填料不至于太紧，让液体能够顺利通过。
问题十二
现在有一个供应商向我们推销固相微萃取器材，这个能不能讲讲这种技术的优缺点。
回答：简单说一下差别：SPME目前仅限于挥发性样品(比如植物挥发性成分分析)和液体样品分析，范围比SPE窄很多。不过在挥发性样品和液体样品分析时，SPME的操作要比SPE稍微简单些；SPME的净化效果不如SPE。
问题十三
请问：SPE有没有有效期，放置时间过长，会造成什么影响？
回答：任何产品都是有有效期的。放置时间过长，吸附剂基团可能会发生氧化、自然分解、和光解等问题。ProElut 产品采用了真空包装，保证产品在两年内使用不会有问题。
问题十四
请问：固相萃取柱的局限是什么？
回答：固相萃取的方法依赖性较大。比如您进行A项目时的方法不能用于B项目。每一个具体的项目都需要重新建立方法。另外固相萃取方法的建立涉及到目标化合物性质、基质性质、提取溶液、样品溶剂、淋洗液、洗脱液等均需要考虑，涉及的知识面比较广，很多分析工作者限于知识面，在开发方法时困难重重。不过，有实力的SPE厂家会开发热点方法，并编撰技术手册，为用户提供了很大的方便。