会预报天气的昆虫教案:gus基因检测

来源：百度文库编辑：偶看新闻时间：2024/06/12 08:53:02

gus基因检测
gus基因就是转β-葡糖醛酸酶基因
　　该基因产物为GUS 蛋白质，相当稳定而不易降解，并为一水解酵素，有简易的测定方法；且可使用市售的基质 (substrate) 在原位 (in situ) 显现出酵素的活性，以肉眼即可检测其产物，非常方便。
　　gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。根据地gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。

　　组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X-Gluc）作为反应底物。将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡，若组织细胞发生了解gus基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出 Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。

作用原理：gus基因表达出GUS，在适宜条件下该酶可将X-Gluc水解生成蓝色物质，初始产物并不带颜色，为无色的吲哚衍生物，后经氧化二聚作用形成5,5’-二溴-4,4’-二氯靛蓝染料，此靛蓝染料使具有Gus活性的部位或位点呈现蓝色，可用肉眼或在显微镜下观察到。

GusA（uidA）基因编码β一葡糖苷酸酶基因。它是一种催化葡糖苷酸糖苷键水解的水解酶，其中很多水解产物具有发色团或形成荧光物质，因此可以用分光光度计、荧光剂和组织化学法对其活性进行定性或空间定位分析。GusA基因由于具有明显区别于受体细胞遗传背景的选择标记基因，因此可以用来检测组装的嵌合基因在导人细胞后是否具有功能。　　GUS组织化学分析中最常用的底物为X—Gluc（5-brom-4-chloro-3-indolyl glucuronide）,在GUS活性作用下，X—Gluc产生一种不可溶的蓝色沉淀（5，5’-二溴，4，4一二氯靛蓝染料）。

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