超频三水冷好吗:过筛法分离肾小球
来源:百度文库 编辑:偶看新闻 时间:2024/10/02 17:50:44
目前分离肾小球有以下方法:激光捕获显微切割肾小球、过筛法分离肾小球、磁珠合并过筛法分离肾小球。激光捕获显微切割肾小球法具有精确度高的优点,缺点是捕获组织量相对较少,适用于对组织特异性要求较高、标本珍贵且获取较少组织即能达到解决问题的目的;过筛法分离肾小球具有短时间内能捕获大量活组织的优点,缺点是获取的目的组织纯度相对较差;磁珠合并过筛法分离肾小球既弥补了激光捕获显微切割捕获肾小球量相对较少的缺点又能满足获取纯度相对较高的肾小球的优点,但磁珠价格昂贵,故不作为常规方法。所以根据我们的目的,应综合考虑采取合适的分离方法以获取肾小球。
下面主要来介绍一下最常用的过筛法分离大鼠肾小球的技术方法:
1、取肾皮质:10%水合氯醛0.3-0.5ml/100g,麻醉大鼠。无菌条件下用 4℃PBS冲净肾脏组织表面血迹,剥离肾被膜,剪取肾皮质,将获取的肾皮质混在一起剪成1mm×1mm×1mm小块。
2、筛网研磨:依次放入3层不锈钢筛网。孔径分别为 172um,108um,75um。在最上层筛网上用消毒针筒轻碾肾皮质,同时用4℃PBS冲洗使其滤入下层筛网(108um)。用PBS冲洗这一道筛网(同时轻碾组织)。到75um 这层筛网时,尽量只冲洗不碾磨。
3、验证纯度:在第 3层滤器上,用无菌的吸管吸取少量于培养皿中,显微镜下观察,若见纯净肾小球达95%以上, 即可停止冲洗。
4、 收集小球:将培养皿中含肾小球的液体转移到50ml离心管。
5、 离心:1200rpm 4℃ 3-5min,缓慢弃上清,沉淀即为肾小球。
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